注:以50μl PCR反應體系為例,每次使用25μl 2×MasterMix,1 ml可做40次50μl PCR反應。
產品簡介:
本產品包含Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應緩沖液、PCR反應的增強劑和優化劑以及穩定劑,濃度為2×。使用時,只需補加實驗所需的引物和模板后即可進行PCR反應,可最大限度的減少人為誤差,具有快速簡便、穩定性好等優點。適用于常規PCR反應、復雜模板(如GC含量高,有二級結構)的擴增以及大規?;驒z測。使用該產品得到的PCR擴增產物末端含有一個A堿基,可以直接用于TA克隆。
質量控制:經檢測無外源核酸酶活性;PCR方法檢測無宿主殘余基因組DNA;能有效地擴增人基因組中的單拷貝基因。
使用說明:
1、冰浴中徹底融化2×MasterMix,混勻后離心快甩將溶液收集到管底。
2、按照下表在0.2ml PCR管中制備反應體系:
| 50μl反應體系 | 終濃度 |
2×MasterMix | 25μl | 1× |
上游引物 10μM | 1-5μl | 0.2-0.8 μM |
下游引物 10μM | 1-5μl | 0.2-0.8 μM |
模板 | × μl | 10pg-1μg |
水 | 補至50μl |
|
3、快甩離心將反應液收集到管底。
4、PCR儀如果沒有熱蓋加熱的話,補加25μl礦物油。
5、PCR儀上執行以下程序:
步驟 | 溫度 | 時間 | 循環數 |
初始變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 30 sec | 25-40* |
退火 | Tm-5℃* | 30 sec |
延伸 | 72℃ | 1 min/kb |
最后延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
注: PCR 反應條件視模板、引物等的結構條件不同而各異。在實際操作中需根據模板、目的片段的大小、堿基序列和引物的長短等具體情況,設定最佳的反應條件(溫度、時間等)。
注意事項:為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
保存條件:-20℃可長期保存;4℃穩定貯存3個月。經常使用時,一旦融化后請4℃貯存,盡量避免反復凍融。