產品簡介:
快速轉膜液使用獨特配方,能高效快速地將蛋白轉移到印跡膜(PVDF 或硝纖膜)上。使用濕轉法(Tank blot)或半干轉法(Semi-dry blot)方法,能在 10-40 min 完成轉膜過程。
快速和環保:快速轉膜液不使用甲醇,減輕了對實驗者和環境的傷害。
兼容性好:快速轉膜液能兼容 Laemmli 膠,預制膠,Bis-Tris 膠等多種凝膠。
轉移效率高:快速轉膜液對分子量跨度較大的蛋白也有很好的轉移效率,有效解決了大小蛋白不能在同一張膜上同時轉移的問題。
使用說明:
轉膜前的準備:
5-6 張裁好的濾紙;裁好的轉印膜;足夠的1×快速轉移buffer;無水甲醇(處理PVDF膜用)
一 、濕轉法(Tank blot):
1、按照下表配制 1×快速轉膜液:
| 1×快速轉膜液配制量 |
| 100 ml | 500 ml | 1000 ml |
10×快速轉膜液 | 10 ml | 50 ml | 100 ml |
無水乙醇 | 20 ml | 100 ml | 200 ml |
超純水 | 70 ml | 350 ml | 700 ml |
2、將濾紙和海綿浸泡在 1×快速轉膜液中,完全浸濕,平衡 5 分鐘。
3、PVDF膜使用前要用無水甲醇潤濕30秒,隨后浸泡在1×快速轉膜液中,完全浸濕,平衡 5 分鐘。
4、將凝膠在超純水中浸泡漂洗 2 分鐘,去除膠表面的SDS;隨后將凝膠浸泡在 1×快速轉膜液中。
注意:水中漂洗時間一定不能超過 2 分鐘,否則分子量較大的蛋白不能完全轉移。
5、按照以下順序做好轉印三明治結構:
負極(陰極)
一塊海綿
2mm 濾紙凝膠
轉印膜
1 mm 濾紙
一塊海綿(根據三明治的厚度選擇是否使用) 正極(陽極)
注意:
① 要徹底清除三明治結構中的氣泡,適當補加 1×快速轉膜液保持三明治結構濕潤。
② 三明治結構的制作不能太緊,也不能太松。太緊和太松都會影響轉印效果。如果太緊的話,可以去除陽極一側的海綿或濾紙。
6、將三明治結構放于轉移槽中。
7、濕轉推薦使用恒流轉移:
| 恒電流 | 轉移時間 | 降溫措施 |
一張膜 | 375 mA | 35 -40min | 不需要 |
兩張膜 | 375 mA | 35 -40min | 需要 |
二、半干轉(Semi-dry blot):
1、按照下表配制 1×快速轉膜液:
| 1×快速轉膜液配制量 |
| 100 ml | 500 ml | 1000 ml |
10×快速轉膜液 | 10 ml | 50 ml | 100 ml |
無水乙醇 | 20 ml | 100 ml | 200 ml |
超純水 | 70 ml | 350 ml | 700 ml |
2、將濾紙和海綿浸泡在 1×快速轉膜液中,完全浸濕,平衡 5 分鐘。
3、PVDF膜使用前要用無水甲醇潤濕30秒,隨后浸泡在1×快速轉膜液中,完全浸濕,平衡 5 分鐘。
4、將凝膠在超純水中浸泡漂洗 2 分鐘,去除膠表面的SDS;隨后將凝膠浸泡在 1×快速轉膜液中。
注意:水中漂洗時間一定不能超過 2 分鐘,否則分子量較大的蛋白不能完全轉移。
5、按照以下順序做好轉印三明治結構:
負極(陰極)
下層濾紙凝膠
轉印膜 上層濾紙
正極(陽極)
半干轉時,濾紙、膠、膜之間的大小,一般是下層濾紙≧膜≧膠≧上層濾紙。上下兩層濾紙一定不能接觸;濾紙、膠、膜之間千萬不能有氣泡。接觸的濾紙和氣泡會造成短路。
6、半干轉推薦使用恒壓轉移: 25 V,10-20 分鐘。
三、問題解決:
問題 | 可能原因 | 解決方法 |
轉膜不充分 | 濕轉轉移槽鉑金絲有鹽沉積 | 徹底用超純水清洗轉移槽 |
轉移膜,濾紙,凝膠沒有在1×轉移緩沖液中徹底平衡 | 轉移膜,濾紙,凝膠要在1×快速轉膜液中平衡5分鐘,震蕩平衡更好 |
PVDF膜沒有用甲醇預處理 | PVDF膜要用甲醇徹底潤濕,然后在1×快速轉膜緩沖液中平衡5分鐘 |
轉膜時間不充分 | 適當延長轉膜時間 |
不連續的轉膜 | 凝膠和膜之間有氣泡 | 轉膜三明治做好后,用滾軸把凝膠和膜之間的氣泡趕走 |
PVDF膜沒有用甲醇預處理 | PVDF膜要用甲醇潤濕,然后在1×快速轉膜緩沖液中平衡5分鐘 |
轉膜設備不工作 | 電泳電源不配套 | 電泳電源要符合以下參數:300W,5-300V,0.01-3A |
注意事項:為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
保存條件:18-26℃常溫貯存有效期一年。